108 жизнеспособных клеток

Число ядерных клеток определяют подсчетом в растворе Турка. Выход клеток из каждой бедренной кости составляет 107. В каждую лунку 6-луночной панели Costar вносят по 2-10 клеток костного мозга мышей С. AL20 в 2 мл МСИДИ, содержащей 5 СПК. Это соответствует 2-105 клеткам на 1 см2. Культуры инкубируют в увлажненном термостате при 37 С и 5 СОг. Мы обычно заворачиваем чашки в пластиковую пленку для предотвращения циркуляции воздуха, что существенно снижает вероятность контаминации микроорганизмами. Через 24 ч клетки ресуспендируют в лунках и неприкрепив- шиеся клетки удаляют полностью, заменяя культуральную среду на свежую. Истощенную среду вновь полностью заменяют на 5-й и 9-й день инкубации. Конфлюентный слой прикрепившихся клеток обычно получают через 10-12 дней культивирования. К этому времени культуральную среду заменяют 2 мл полной среды RPMI 1640, содержащей гидратированный микроноситель Cytodex 1 в концентрации 1 мгмл. Оседая, гранулы микроносителя образуют правильный монослой. Инкубацию продолжают еще 4 дня, в течение которых клетки со дна лунок распространяются по поверхности микроносителя. Когда слой клеток на микросферах становится конфлюентным, культуры готовы к заселению предшественниками В-клеток.

Вчера был на курсах, изучали покупку 1 комнатной квартиры. Буду инвестировать в эту деятельность.

Оставить комментарий