К носитело добавляют 2 мл раствора

Если исследователь заинтересован в анализе РНК, образуемой трансформантами, содержащими вектор с последовательностями плазмиды pBR322, не следует пользоваться зондами, которые содержат pBR322. Многие трансформанты образуют РНК, которая содержит последовательности плазмиды pBR322, и в результате могут быть получены ошибочные данные. Недавно было описано много новых методов для получения стабильного переноса генов использование векторов на основе ретровирусов Shimotohno, Temin, 1981, слияние с липосомами Schaefer-Ridder et al.1982, слияние с мембранами эритроцитов Wiberg et al.1983, метод мембранного укола Yamamoto et al.1981, электрический шок Neumann et al.1982 и прямая микроинъекция ДНК Capecchi, 1980. Как отмечалось ранее, многие лимфоидные линии не удается трансформировать с помощью слияния с протопластами бактерий. В таких случаях можно попытаться использовать другую методику. Разработка технологии получения рекомбинантных ДНК необычайно расширила наше понимание проблемы структуры и функции генов. В большинстве успешных методов клонирования генов важное место занимает клонирование кДНК, поскольку 1 кДНК представляет собой инструмент для последующего скрининга геномных библиотек с целью выделения гена, которому она соответствует, и 2 кДНК соответствует структуре зрелой мРНК, в то время как данный ген содержит в своей структуре интроны по крайней мере в большинстве случаев. Кроме того, поскольку кДНК представляет собой непосредственный продукт зрелой мРНК, можно с помощью кДНК синтезировать полипептиды, кодируемые соответствующей мРНК- Это открывает возможность получения редких белков с помощью биотехнологии для их последующего анализа или практического использования. В настоящее время довольно трудно найти для клонирования новую кДНК, поскольку большинство кДНК, которые легко клонируются, уже проклонированы. Имеющие биологический интерес мРНК, которые не были проклонированы, содержатся в очень малых количествах, и поэтому данные об аминокислотных последовательностях и других свойствах белков, которые они кодируют, довольно скудны. В связи с этим единственным способом для выделения кДНК-клона, соответствующего данной мРНК, является биологическое определение соответствующего белка или его детектирование с помощью антител. Оба эти метода скрининга могут использоваться в рамках процедуры, включающей следующие этапы 1 гибридизацию, 2 выделение мРНК, соответствующей кДНК, и 3 микроинъекцию выделенной мРНК в ооциты шпорцевой лягушки. Более удобным примером, однако, является экспрессия клонированных кДНК в клетках- хозяевах с образованием активных в биологическом или антигенном отношении продуктов.

Открытие бизнеса в Казахстане

Оставить комментарий