На протяжении последних нескольких лет

на протяжении последних нескольких лет средуVoller et al.1976. Изотип-специфический иммуноферментный анализ осуществляют следующим образом. Полистиреновые лунки микропанелей Dynathech, Billinghurst, Sussex, Англия обрабатывают в течение ночи при 4С иммуноглобулиновой фракцией кроличьей антисыворотки к р,- у- или а-цепям человека, полученной от фирмы Dakopatts Copenhagen, Дания; 50 мкгмл IgG в 20 мМ фосфатном буфере, рН 7,5, или мышиными монокло- нальными антителами Е-45 против е-цепей человека 10 мкгмл; любезно предоставленными G. Damiani из Генуэзского университета. Лунки промывают ЗФР и вносят в них определенные разведения проб в ЗФР — 5 СПК при комнатной температуре на 2 ч. Лунки промывают и на следующие 2 ч вносят меченные щелочной фосфатазой кроличьи антитела к р,- у- и а-цепям человека. Для количественного определения IgE добавляют кроличьи антитела к -цепи человека, а затем конъюгированные со щелочной фосфатазой козьи антитела к иммуноглобулинам кролика. После окончательной отмывки определяют связанную с лунками ферментативную активность, используя раствор п-нитрофенилфосфата 1 мгмл в 10-ном ди- этаноламиновом буфере, рН 9,8. Оптическое поглощение измеряют на автоматическом фотометре Flow Multiskan. Для построения стандартных кривых используют стандартную сыворотку или известное количество очищенного иммуноглобулина. Чувствительность теста составляет 10 нгмл для IgM, IgG и IgA и 0,5 нгмл для IgE. Примесь очищенного иммуноглобулина постороннего изотипа вплоть до концентрации 10 мкгмл в тесте не обнаруживается. Т-клетки, повторно стимулированные во вторичной СКЛ и размноженные в среде GM в течение 1-2 нед, растут в суспензии, состоящей из отдельных клеток, и обладают жизнеспособностью, близкой к 100.

Группа компаний Пожарный эксперт: аудит пожарной безопасности. Проверка систем пожаротушения.

Оставить комментарий