Сбор Фракций

сбор фракций собиралиМинимальное разведение должно дать несколько колоний, хорошо отделенных друг от друга. На следующий день готовят один набор фильтров-реплик по прописи, приведенной в разд. III, И, также с использованием фильтров Millipore. При повторном скрининге обычно нет необходимости готовить второй набор фильтров для гибридизации. После подрастания реплицированных бактерий обычно около 6 ч при 37 С клетки лизируют на фильтрах-репликах, которые далее проводят через этапы денатурации и связывания ДНК, как описано в разд. III, К. Исходные фильтры хранят при 4 С используют для последующего отбора положительных колоний. Фильтры инкубируют в большой стеклянной чашке Петри, покрытой стеклянной пластинкой, как описано ранее разд. IV, А. Для гибридизации используют супернатант от исходного скрининга разд. IV, Б, который прогревают 10- 15 мин при 70 С для денатурации ДНК и охлаждают в смеси воды и льда. После гибридизации фильтры отмывают, экспонируют и отбирают на них одиночную, находящуюся на достаточном расстоянии от других положительную колонию разд. IV, В-Д. Положительный клон высевают штрихом в свежую чашку с агаром L-амп и подготавливают ночную культуру для выделения ДНК в среде L-амп. 1 мл ночной культуры вносят в стерильный пластиковый флакон, содержащий 70 мкл ДМСО. Флакон закрывают крышкой, его содержимое перемешивают на вортексе, быстро замораживают в жидком азоте и хранят при -70 С.

Студия красоты Планета Солнца: стоун-терапия цена. Массаж горячими камнями.

Оставить комментарий