Велки

V, В, 3 фракции по 0. 5 мл собирали в полиэтиленовые пробирки размером 17х X100 мм Falcon, содержащие по 1,5 мл модифицированной Исковом среды Дульбекко, рН 7 МСИДИ. Перед тестированием биологической активности фракции фильтровали через фильтр с размером пор 0,45 мкм. Во многих лабораториях признано полезным использование при обратнофазовой хроматографии теста на разделение стандартной смеси белков. При разделении смеси шести стандартных белков в системе 1 рис. 6-4, Л проверяется не только разрешение колонки, но и работа системы насосов и градиент- смесителя. Степень разрешения апомиоглобина и карбоангидра- зы Б человека в этой тест-смеси является важным параметром, характеризующим как работу колонки, так и селективность системы колонка — подвижная фаза для белков, более гидрофобных, чем БСА. Подбирая различные системы растворителей при обратнофазовой хроматографии, можно изменять и селективность колонок. Например, Беннет и др. Bennett et al.1980 показали, что на обратнофазовых колонках связывание пептидов с носителем можно менять, заменяя один гидрофобный кислотный противоион на другой. На рис. 6-4. приведена иллюстрация этого эффекта при замене ТФК на ГФБК при использовании 1-пропанола для элюции смеси стандартных белков с колонки С-18 система 2. При разделении стандартных белков на колонке Aquapore RP300 в системах 1 и 2 наблюдали такую же селективность, как и в приведенном примере. Другим способом селективность можно изменять, используя тройную систему растворителей Jandera et al.1981 с одновременным применением градиента ацетонитрила и 1-пропанола в 10 мМ ГФБК система 3. Рис.

Оставить комментарий