Чаще других

1980; paige, чаще другихПри использовании этого метода хро- матограмму сначала инкубируют с моноклональными антителами, а затем с меченными 1251 антителами против IgG мыши. Обладающие антигенной активностью липиды выявляют с помощью радиоавтографии отмытой и высушенной хроматограм- мы рис. 9-3. В сходном методе Towb, in et al.1984 липиды переносят блоттингом с хроматограммы на нитроцеллюлозный фильтр, который затем обрабатывают антителами таким же образом. С помощью этого метода можно выявлять антигены в количестве до нескольких нанограммов, т. е. его чувствительность на два порядка выше чувствительности, достигаемой при химическом детектировании с использованием паров иода и красящих реагентов. Не все виды покрытых силикагелем пластин для ТСХ одинаково пригодны для иммунологического выявления липидов. Слой силикагеля должен быть достаточно прочно связан с подложкой и не должен сходить с неё при обработке пластины водными буферными растворами. Наилучшие результаты мы получили на алюминиевых пластинах для высокоэффективной тонкослойной хроматографии Merck, Darmstadt, ФРГ, покрытых силикагелем 60. Ймпрегнирование тонкослойной хроматограммы небольшим количеством полимера полиизобутилметакрилата увеличивает прочность слоя силикагеля Brockhaus et al.1981. Эта обработка придает силикагелю водоотталкивающие свойства и в целом приводит к снижению фона и повышению чувствительности при использовании многих, но не всех типов моноклональных антител. Пластину для ТСХ с алюминиевой подложкой разрезают ножницами на полоски длиной 10 см и различной шириной в зависимости от числа образцов 7 мм на каждый образец и по 15 мм на поля с каждой стороны. Линию нанесения образцов проводят в 15 мм от края пластины мягким карандашом и отмечают точку нанесения для каждого образца. Липиды растворяют в проявляющем растворе, образец 1 мкл набирают в микрошприц и наносят на пластину в виде тонкой полоски.

Кондиционирование от Техвентпром: обслуживание систем кондиционирования в наличии. Огромный ассортимент.

Оставить комментарий