Концентрироеание разбавленных образцов

200 концентрироеание разбавленных образцовЕсли, например, на слой с плотностью 1,085 нанести слой с плотностью 1,075, а не 1,08, то клеточная фракция, локализованная после центрифугирования над слоем с плотностью 1,075, будет содержать примеси всех тех клеток, плотность которых меньше 1,075, а не 1,08, и, таким образом, в препарате будет много более крупных клеток, имеющих меньшую плавучую плотность. Мы использовали также градиент, состоящий из 70, 60, 50 и 40-ного перколла и получили хорошие результаты на фракции клеток, выделенной из 70 -ного перколла. Выход клеток при использовании такого градиента несколько выше по сравнению с предыдущим. При использовании фиколла Pharmacia Fine Chemicals клетки в 5 мл CP наносят на его слой объемом 3-5 мл и центрифугируют при 1400 g в течение 20 мин при комнатной температуре. Клетки, локализованные в интерфазе, отбирают и промывают 3 раза в СР. д. В-клетки активируют, используя митогены или антитела к иммуноглобулинам. Липополисахарид ЛПС; Difco, источник Escherichia coli 055 В5, очистка по Вестфалю используют в конечной концентрации 50 мкгмл. Хотя мы обычно титруем все партии ЛПС для определения его оптимальной митогенной дозы, практически во всех случаях наилучшая стимуляция имела место при концентрации ЛПС 50 мкгмл. Для стимуляции с помощью антител к иммуноглобулинам мы обычно использовали связанные с сефарозой моноклональные антитела против Ig АК 13, которые описал Лептин Leptin, 1983. Связывание с активированной BrCN сефарозой проводили в соответствии с процедурой, рекомендованной в руководстве Аффинная хроматография принципы и методы, изданном фирмой Pharmacia Fine Chemicals. Использовали примерно 1 мг антител на 1 мл набухшего геля. Наилучшие результаты получены с очищенными антителами, однако можно использовать и фракцию, осаждаемую при 50-ном насыщении сульфатом аммония культуральной жидкости гибридом. В этом случае следует удвоить количество связываемого с сефарозой белка. Мы и другие исследователи убедились, что необходимым условием для хорошего пролиферативного ответа на действие растворимых факторов является предварительная активация клеток. Есть два основных подхода для достижения предварительной активации. При первом подходе Howard et al.

Ремонт вентиляции, восстановление вентиляционного короба, отделка и капитальный ремонт квартир.

Оставить комментарий