Пенициллина, 0,1 мл 2-МЭ 5-Ю-2 М, 0,8 мл смеси витаминов и аминокислот, состоящей из 2,5 мгмл L-аланина, 2,5 мгмл L-аспарагина, 3 мгмл L-аспарагиновой кислоты, 7,5 мгмл L-глутдминовой кислоты, 4 мгмл L-пролииа и 11 мгмл пирувата натрия все ингредиенты растворяют при перемешивании в 96 мл дистиллированной воды при 40 С и затем к ним добавляют 0,64 мл витамина Bi2 и биотина исходный раствор витаминов содержит 1 мг каждого из них в 4 мл 1 мМ HCI, 0,4 мл L-цистина исходный раствор содержит 7 мгмл в 0,25 М НС1, 250 мкл обезжиренного БСА Behringwerke A. G.Marburg a. d Lahn, ФРГ; исходный раствор содержит 200 мг БСА в 1 мл дистиллированной воды, 0,5 мл соевого лецитина Nattermann, Cie, Cologne, ФРГ; обработанная ультразвуком смесь содержит 200 мг липида, 10 мкл токоферола Sigma, 2,5 мл обезжиренного раствора БСА и 47,5 мл среды Дульбекко, 10 мкл человеческого трансферрина Behringwerke A. G. ; исходный раствор содержит 1 г трансферрина в 10 мл забуференной ГЭПЭС 10 мМ среды Дульбекко с добавлением 0,84 мл раствора FeCI3 7,4-Ю-9 М Fe3 на 1 мг трансферрина, растворенного в 0,1 мМ HCI и дистиллированную воду до 100 мл. Подробное описание приготовления и условий хранения этой среды см. в работах Iscove, Melchers, 1978; Iscove, 1984. Как при получении культур прикрепляющихся клеток, так и при приготовлении суспензий, лишенных мышиных зрелых В-клеток, собирают клетки костного мозга и манипулируют с ними одинаково. Все процедуры проводят в ламинаре в стерильных условиях. Мышей забивают с помощью асфиксии в С02 и немедленно споласкивают в 70-ном этаноле. Удаляют кожу с задней части животного, в том числе с обеих задних лап. Для того чтобы отделить бедренную кость от мышечной ткани, через бедренную мышцу проталкивают два широких пинцета Aesculap BD45, Fa. Riegger, Базель, Швейцария так, чтобы бранши пинцетов обхватили бедренную кость. Затем пинцеты осторожно двигают вверх и вниз на полную длину кости, отделяя от нее мышцы. После этого пинцеты поворачивают, разрушая сочленение между бедренной и болыпебер- цовой костью, а бедренную кость вытягивают наружу и очищают от ткани. Обнаженную бедренную кость разрезают чуть ниже прикрепления к тазу и переносят в чашку Петри, содержащую охлажденный во льду СР. Затем ее берут стерильным пинцетом за середину и содержимое костномозговой полости тщательно вымывают 2 мл CP, используя шприц на 2 мл с иглой 25.

ОАО «Синяя Птица»: изготовление папок с логотипом стоимость. Различная рекламная продукция на заказ.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.