После экспонирования в течение необходимого времени кассету вынимают, дают ей согреться до комнатной температуры в запечатанном виде, вынимают пленку и проявляют ее в автомате для проявления пленок X-Omat Kodak разд. II, А, 17. Чувствительность детектирования при использовании для анализа описанной выше методики можо оценить с помощью двух параметров. Первый параметр представляет собой минимальное содержание белка в образце, при котором этот конкретный белок может быть выявлен в виде пятна. Второй — это минимальное число клеток размер клона, которое необходимо для получения полного набора белковых пятен на соответствующих электрофореграммах. ОФаррелл OFarrell, 1975 установил, что пятно можно обнаружить при экспонировании геля в течение 1 нед 10 000 мин, если в нем присутствует активность 3 распмин, сосредоточенная на 1 мм геля. Это относится к радиоавтографическому детектированию. Если же учесть усиливающий эффект флюорографии, то можно ожидать 15-кратного увеличения чувствительности методики. В этом случае для образования пятна, вероятно, будет достаточна активность 0,2 распмин. По данным наших опытов с лимфоцитарным 0а2-белком П. Робинсон, личное сообщение установлено, что легко выявляются белки, присутствующие в количестве 10 молекул на клетку. Н-2-Молекулы, присутствующие в клетках в больших количествах, чем 0а2-белок 1-2-10 молекул на клетку, можно выявить с помощью двумерного электрофореза в неочищенных клеточных лизатах. Вместе с тем для аналогичного выявления За2-молекул необходимо их предварительно осаждение с помощью иммунопреципитации. Оа2-Молекулы были выявлены в материале, эквивалентном 10 клеток, меченных 10 мин с радиофлюорографическим детектированием при экспозиции в течение 1 нед. Мы считаем, что в ситуации, когда можно применять длительное мечение и на гели можно наносить большие количества материала, возможно выявление 100 молекул белка на клетку.

печи для бани

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.