14-2, ясно показывают, что фракция прикрепившихся клеток не вносит никакого вклада в пул зрелых В-клеток. При приготовлении популяции предшественников В-клеток из костного мозга существует еще одна проблема. Если сравнить клетки, приготовленные с помощью различных методов, то можно видеть, что испытанные популяции различаются по количеству предшественников, способных созревать без микроокружения. Этот важный для метода аспект должен быть изучен в дальнейших исследованиях. Наши знания о процессах дифференцировки гемопоэтиче- ских клеток в значительной степени основаны на клональном анализе, который позволяет проследить потомство единственной клетки-предшественника. Этот анализ оказался полезным при изучении последовательности этапов дифференцировки в пределах клеточных линий, компартментации клеточных субпопуляций и роли растворимых медиаторов роста и дифференцировки. Впервые с помощью клонального анализа in vitro были обнаружены миелоидные предшественники, способные дифференцироваться в гранулоциты или макрофаги Pluznik, Sachs 1965; Bradley, Metcalf, 1966. Впоследствии были разработаны варианты анализа, позволяющие обнаруживать предшественники эритроцитов Stephenson et al.1971; Axelrad et al.1974, предшественники мегакариоцитов Metcalf et al.1975a, а также предшественники с менее ограниченным потенциалом, способные дифференцироваться при росте в полужидкой среде по нескольким направлениям Johnson, Metcalf, 1977. Сходные методы использовали также и для разработки анализа клонального роста В-клеток Metcalf et al.1975 b, 1976; Kincade et al.1976. Описаны методы клонирования В-клеток в жидкой среде с помощью лимитирующего разведения суспензии или микроманипулирования с клетками, а также на фрагментах селезенки Klinman, 1972; Quintans, Lefkovits, 1974; Andersson et al.1977; Wetzel, Kettman, 1981. Применение этих методов для обнаружения и подсчета предшественников В-клеток встречало большие трудности, прежде всего в силу малочисленности соответствующих лимфоцитов в большинстве популяций.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.