Поэтому при длительном хранении их следует держать при низкой температуре в атмосфере азота. Нативные клетки 108 или клетки, фиксированные 0,5 -ным формальдегидом, промывают забуференным фосфатами физиологическим раствором ЗФР и осаждают на дно стеклянной центрифужной пробирки. Осадок сначала ресуспендируют в 2 мл метанола, а затем к суспензии добавляют 2 мл хлороформа. После инкубации в течение 15 мин с периодическим встряхиванием на вортексе суспензию центрифугируют в течение 5 мин при 5000 обмин и супернатант переносят в чистую стеклянную пробирку. К нему добавляют 2 мл хлороформа, 1,2 мл воды и тщательно перемешивают смесь пипетированием пастеровской пипеткой. Суспензию разделяют на легкую и тяжелую фазы центрифугированием в течение 5 мин при 5000 обмин при комнатной температуре. Верхнюю фазу объем примерно 2,5 мл можно использовать в качестве антигена для РИА без дальнейшей очистки. Если необходим более чистый препарат, то верхнюю фазу концентрируют до конечного объема 1 мл при 37 С в водяной бане с помощью потока азота. Патрон С18 для обратнофазовой хроматографии сначала промывают 2 мл смеси хлороформ — метанол 11 при небольшом давлении, создаваемом резиновой грушей или пастеровской пипеткой, а затем — последовательно 2 мл метанола и 2 мл воды. После этого через патрон медленно пропускают концентрированную верхнюю фазу и затем 2 мл воды и воздух. Липиды элюируют 1 мл смеси хлороформ — метанол 11 и элюат высушивают в потоке азота. Липидные антигены можно определять с помощью простого качественного теста с применением твердофазного РИА или иммуноферментного анализа ELISA в 96-луночных панелях для микротитрования.

Нужнейшим конкурентным преимуществом является в 21 веке саморазвитие интеллекта. Мир меняется, необходимо быстро адаптироваться в нем.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.