При разделении стандартных белков на колонке Aquapore RP300 в системах 1 и 2 наблюдали такую же селективность, как и в приведенном примере. Другим способом селективность можно изменять, используя тройную систему растворителей Jandera et al.1981 с одновременным применением градиента ацетонитрила и 1-пропанола в 10 мМ ГФБК система 3. Рис. 6-4, В иллюстрирует изменение селективности при разделении шести стандартных белков в системе 3. При этом играют роль как взаимодействия, обеспечивающие обратнофазовое разделение, так ионные взаимодействия, поскольку длинная гидрофобная боковая цепь ГФБК может взаимодействовать с алкильными группами матрицы, а кислотный остаток ГФБК способен эффективно связываться с положительно заряженными группами белков в растворе Bennett et al.1980. Тар и Крэб Tarr, Crabb, 1983 также установили, что тройная система растворителей, содержащая ацетонитрил и 1-пропанол, эффективна при фракционировании мембранных белков на обратнофазовых колонках с CN-активи- рованным носителем и дает хорошие выходы по белку. Стандартные белковые образцы могут также использоваться для выяснения количественного выхода белка при обратнофа- зовой хроматографии. Применение для этих целей метилированной метил-14С карбоангидразы New England Nuclear показало, что выход этого относительно гидрофобного белка при хроматографии на колонке Vydac С-18 составляет 100, причем в случае карбоангидразы полнота выхода практически не меняется при внесении в колонку от 50 нг до 2 мг белка разд. V, Б, 7. Регистрируемое детектором количество элюи- рованного белка линейно возрастало в зависимости от массы внесенного препарата, что подтверждалось аминокислотным анализом рис. 6-5. Однако такие гидрофобные белки, как овальбумин, часто элюируются с меньшей эффективностью выход 80. Regnier, 1983. Во многих случаях приемлемыми системами для элюции оказались градиентные растворы ацетонитрила, содержащие ион-парный агент ТФК в концентрации 0,1.

Праздничное агентство Однажды: новогодние корпоративы недорого. Организация и проведение нового года.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.