делают так, противоположные взаимодействия семиНесмотря на сообщения о возможности длительного культивирования нетрансформированных В-клеточных линий Howard et al.1981, по-прежнему отсутствуют надежные и воспроизводимые методы получения и поддержания таких линий. Целью этой главы является не обсуждение моделей активации В-клеток, а описание методик определения активности факторов, стимулирующих пролиферацию В-клеток. Для того чтобы методика тестирования была приемлемой, она должна отвечать ряду требований. В системе должно достигаться насыщение, т. е. кривая титрования активности должна иметь выход на плато. При разбавлении фактора эта кривая должна соответствовать одноударной кинетике, и, наконец, в предельных разведениях должен достигаться фоновый уровень. Применение культуральных сред на основе RPMI 1640 или модифицированной Дульбекко минимальной среды с коррекцией по Искову дает примерно одинаковые результаты. К этим средам добавляют антибиотики, р-меркаптоэтанол 5- Ю-5 М и соответствующее количество сыворотки плода коровы СПК см. ниже. К среде RPMI добавляют также L-глу- тамин и пируват до конечной концентрации 1. б. Партии СПК проверяют на митогенную активность и на способность поддерживать стимулированную митогенами пролиферацию лимфоцитов. Рутинное тестирование, применяемое в нашей лаборатории, включает стимуляцию спленоцитов мышей C57BL6 в концентрации 1,5-10-105 клетокмл липополи- сахаридом ЛПС или Кон-А. Сыворотку из новой партии титруют против сыворотки из уже проверенной партии, используемой в качестве стандарта, и через два дня культивирования определяют включение тимидина в стимулированных и нести- мулированных культурах. Кроме того, на четвертый и шестой день культивирования определяют синтез БОК IgM и IgG3 соответственно.

facebook на русском

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.