На кассете отмечают дату проявления. Перед проявлением кассетам дают возможность прогреться до комнатной температуры, удаляют усиливающий экран и пленку и закрывают кассету, чтобы избежать какого бы то ни было движения фильтров на бумаге Whatman 3 ММ. После идентификации положительных колоний см. ниже фильтры хранят при -70 С в картонной коробке, а для дальнейшей работы используют проявленную пленку разд. IV, Б. Для того чтобы идентифицировать положительные сигналы, после того как фильтр совмещен с бумагой 3 ММ в соответствии с метками, нанесенными радиоактивными чернилами используют просвечивающий осветитель, маркирующие точки с фильтра переносят на пленку. Положительные гибридизацион- ные сигналы должны присутствовать на обеих репликах, полученных с одного и того же исходного фильтра, что позволяет легко отличить их от ложных радиоактивных сигналов, обусловленных фоновой гибридизацией. Положительные сигналы обозначают соответствующим номером клона. Для отсева положительных колоний из морозильника достают чашки со средой HMF-2 амп, содержащие фильтры с замороженными бактериями. Им дают возможность оттаять при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего фильтры вынимают и вносят в чашки со свежей средой L-амп. Если фильтры слишком влажные, их подсушивают в течение короткого времени на бумаге Whatman 3 ММ. Бактериям дают возможность восстановить свою жизнеспособность с помощью инкубации их в чашках при комнатной температуре в течение 2 ч. Пленку для радиоавтографии помещают на световой ящик и закрывают ее пленкой Saran, на которую кладут фильтр, содержащий живые колонии. Фильтр и пленку совмещают с помощью маркирующих отверстий. Область над положительным сигналом соскабливают стерильной зубочисткой и суспендируют бактерии в 500 мкл бульона L-амп. Фильтр кладут в чашку со средой HMF-2 амп и оставляют ее при комнатной температуре еще на 2 ч. Затем фильтры замораживают, как описано в разд.

Холодильное оборудование от компании Север: холодильное оборудование. Доступные цены.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.