того как когичестео белка при вжх scientificНа практике применение метода лимитируется аффинностью антител и чистотой встречаемости антигена на поверхности клетки. В случае применения антител IgM, которые трудней получать в чистом виде, чем IgG, а также при работе с клетками-мишенями, содержащими большое количество Fc-рецепторов, например со спленоцитами, могут возникнуть серьезные проблемы, связанные с неспецифическим связыванием. Самые четкие результаты получают с лимфобластами, стимулированными Кон-А. При изучении клеток мышей нам удавалось получать хорошие результаты с моноклональными антителами против антигенов Н-2, la, TL, p2m, Thy-1, Ly-1 и Ly-2. Описанный метод был применен для детектирования новых антигенов на фибробластах, трансфецированных клонированными Я-2-генами табл. 12-2. Мы обычно используем этот метод для Н-2- и 1а-типирования стимулированных Кон-А спленоци- тов, которые также применяются как клетки-мишени для цито- токсических Т-клеток. Очень удобно, что эти клетки можно оставлять на холоду в течение ночи перед проведением теста связывания табл. 12-3. Для стандартного Н-2- и 1а-типирова- ния мышей-беккроссов мы хирургически удаляем два или четыре шейных лимфатических узла и готовим клеточную суспензию. Эту суспензию можно разделить как минимум на пять порций в зависимости от набора моноклональных антител, которые будут использоваться для тестирования если ожидают результат о наличии или отсутствии антигена, то нет необходимости считать клетки табл. 12-4. При стандартных условиях т. е. при стандартном типе и числе клеток, а также при стандартной концентрации антител уровень связывания для определенного препарата моноклональных антител зависит от аллельной формы антигена, содержащегося на клетках. На основании таких данных можно достоверно различать высокий, промежуточный и низкий или негативныйТаблица 12-3. Результаты Н-2-тнпирования лимфобластов, стимулированных Кон-А, при исследовании свежевыделенных клеток или клеток после хранения в течение ночи на холоду Приготовление препаратов для определения радиоактивности на жидкостном сцинтилляционном счетчике разд.

Войчик интернет магазин тут.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.