колберт-гарапин и др. методабольшинство методовПосле того как место нанесения высохнет, пластину помещают в стеклянный сосуд для ТСХ, в котором содержится 100 мл проявляющего раствора, заранее уравновешенного с газообразной фазой. Пластину вынимают до того, как растворитель достигнет ее верхнего края. Полностью сухую пластину погружают на 30 с в полиизобутилметакрилат, растворенный в гексане. Как уже отмечалось выше, эта обработка не является обязательной. Сухую пластину выдерживают в течение 30 мин при 4С в буфере Б. Пузырьки воздуха, прикрепившиеся к пластине, следует удалить концом пипетки. Пластину вынимают из буфера Б и тыльную сторону тщательно протирают. Затем ее кладут на кусок парафильма, чуть больший по площади, чем сама пластина, и помещают во влажную камеру. Надосадочную жидкость гибридом разводят в соотношении 1 1 буфером Б и осторожно наслаивают по каплям на хроматограмму 100 мкл на» 1 см2. Влажную камеру устанавливают строго горизонтально. После инкубации в течение 6 ч при 4С пластину промывают 6 раз по 1 мин охлажденным ЗФР на качалке для удаления избытка антител. Затем инкубацию повторяют в тех же условиях с меченными 1251-антителами 5-Ю6 импмин-мл против IgG мыши в буфере Б. После инкубации в течение 6-12 ч и отмывки ЗФР в тех же условиях хроматограмму высушивают и экспонируют с рентгеновской пленкой. Д. Химическое окрашивание Пластину для ВЭТСХ с алюминиевой или, что предпочтительнее, стеклянной подложкой размечают карандашом; образцы минимальное количество 1 мкг наносят на пластину, как описано выше. После хроматографии и высушивания пластину подвергают действию паров иода в течение 5 мин. При этой обработке все нейтральные липиды, фосфолипиды и гликолипиды окрашиваются в цвета от желтого до темно-коричневого.

Тренажерный зал

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.