Другой подход заключается в использовании векторов на основе ретровирусов, которые дают высокую эффективность трансформации интеграции ДНК в хромосомы. В этом случае необходимо решить проблему, как можно после идентификации клона повторно вырезать интегрированную кДНК из ДНК клетки и амплифицировать. Успехи, достигнутые на протяжении последних лет в области генетической инженерии и методов переноса генов, дали возможность непосредственно решать многочисленные вопросы, касающиеся экспрессии генов и регуляции их активности. Гены высокоспециализированных клеток, таких как клетки В-лимфо- цитарного направления дифференцировки, были перенесены в нелимфоидные клеточные линии для изучения тканеспецифиче- ских контрольных элементов на уровне ДНК Banerji et al.1983; Gillies et al.1983. Путем микроинъекции генов, кодирующих немодифициро- ванные легкие цепи иммуноглобулинов Briuster et al.1983, или путем введения искусственных конструкций, содержащих полные функциональные гены, кодирующие тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов Rusconi, Kohler, 1985, были получены трансгенные мыши. Исследования на таких мышах дали ценную информацию в отношении перестройки иммуноглобу- линовых генов, механизмов активации и эффектов обратной связи во время дифференцировки В-клеток в присутствии функционально перестроенного полного гена иммуноглобулина. Гены, модифицированные in vitro и вносимые в определенные клеточные линии, дают возможность нового подхода к изучению определенного клеточного продукта на разных стадиях, начиная от перестройки или активации транскрипции и кончая последними этапами, а также многочисленными стадиями про- цессинга между ними. На протяжении последних нескольких лет методы генетической инженерии значительно упростились и в настоящее время широкодоступны. В данной главе мы остановимся на нескольких основных процедурах. После ознакомления с ними будет нетрудно использовать описанные здесь методы для изучения новых систем. Векторы, используемые для клеточной трансформации, представляют собой плазмиды, которые помимо участка начала репликации содержат один ген резистентности, применяющийся для селекции в клетках прокариот, и второй ген резистентности, который может использоваться для селекции в эукариотических клетках. Такие векторы имеют также несколько сайтов рестрикции, по которым и проводят клонирование нужного гена. Ряд векторов, обладающих этими свойствами, показан на рис.

Ищете специалистов по строительству бани хамам ? Компания «А-Строй» выполнит работы качественно и в срок! Выполняем проектирование, строительство и комплектацию хаммамов.+7 495-601-73-01.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.