здесь метод d alt-кассетыПосле того как фильтр для получения реплики пришел в контакт с исходным фильтром, их нельзя сдвигать относительно друг друга. Полученный сэндвич накрывают стерильной бумагой Whatman 3 ММ и сдавливают большой пластмассовой коробкой с плоским дном. Верхнюю бумагу Whatman 3 ММ выбрасывают иглой для шприца 20 GIV2, содержащей тушь, маркируют фильтры, делая в них 10 отверстий 3 внизу, 3 в середине, 3 вверху и одно в левом верхнем углу. Фильтры осторожно отделяют друг от друга и опять помещают в чашки с агаром L-амп колониями вверх. Фильтр, использованный для получения реплики, кладут в свою чашку, в то время как исходный фильтр помещают в чашку со свежим агаром L-амп. Исходный фильтр инкубируют 1-2 ч при 37 С, после чего аналогичным образом получают вторую реплику. Маркирование отверстия исходного фильтра переносят на вторую реплику с помощью иглы. После получения второй реплики исходный фильтр помещают в чашку со средой HMF-1 амп. С каждого исходного фильтра необходимо получить по три реплики. Третий набор фильтров с репликами инкубируют в чашках со средой HMF-1 амп. Наконец, четвертый фильтр с репликой используют фильтры, смоченные в чашках со средой HMF-1 амп готовят для каждого из исходных фильтров. Два последние фильтра, однако, не отделяют друг от друга, а замораживают в виде сэндвича Hanahan, Meselson, 1983. Сэндвич, обернутый листами бумаги Whatman 3 ММ, смоченными водой, кладут в полиэтиленовый мешочек, который заплавляют и замораживают при -70 С. Три фильтра-реплики, полученные от каждого исходного фильтра два набора на агаре L-амп, один на агаре HMF-1 амп, подращивают при 37С до тех пор, пока диаметр колоний не станет равным 1 мм. Первые два набора используют для скрининга библиотеки с помощью гибридизации см. ниже, в то время как третий набор, инкубированный в чашках с агаром HMF-1 амп, переносят в чашки с агаром HMF-2 амп и оставляют на 2 ч при комнатной температуре.

Все знают курорт Белокуриху как уникальный по свойствам курорт Сибири.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.