Чем меньше размер частиц, тем меньше значение Н и тем выше разрешение. Однако, чтобы сохранить скорость потока подвижной фазы при уменьшении размера частиц, требуется повышение давления, причем с увеличением скорости потока подвижной фазы такое повышение должно возрастать. Использование пористых частиц позволяет снизить давление подачи элюента, но при этом одновременно снизится эффективность колонки. В общем между степенью пористости носителя и эффективностью фракционирования можно найти оптимальное соотношение, при котором достигается эффективное и быстрое разделение. Более подробно эти факторы обсуждают Снай- дер и Керклэнд Snyder, Kirkland, 1979. Как было отмечено выше, для ВЖХ белков разработаны новые типы матриц, которые позволили устранить многие негативные факторы при хроматографии. Первой существенной модификацией, которая привела к значительным положительным эффектам, было улучшение покрытия матриц требуемым адсорбирующим компонентом, например алкильными группами в случае ОФ-ВЖХ, а также блокировка остальных свободных си- ланольных групп низкомолекулярными модифицирующими алкильными группами. Эту модификацию называют еще блокировкой концов. Большинство матриц для ВЖХ делают на основе силикагеля или органических полимеров. В случае сили- кагельных носителей большие трудности возникали из-за веществ, которые практически необратимо связывались со свободными силанольными группами, не заблокированными после пришивки алкильных групп. Вероятность такого связывания особенно велика для белков. Их десорбция при последующих разделениях может приводить к загрязнению препаратов. Благодаря усовершенствованию методов модификации матриц и модификации свободных силанольных групп негативное влияние неспецифической адсорбции на матрицах для ВЖХ было значительно уменьшено. В настоящее время разнообразие оборудования для ВЖХ белков столь огромно, что описать его детально невозможно.

секс

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.