Мы работаем с одной и той же смесью амфолинов с 1983 г. и получаем в основном удовлетворительные результаты рис. 11-13. Для некоторых образцов, по-видимому, может не хватать буферной емкости солюбилизирующего буфера, и в результате может происходить наложение пятен в отдельных участках гелей или сдвиг всей картины разделения к кислому или щелочному концу геля. Белки, присутствующие в разделяемом материале в больших количествах, хорошо фракционируются в первом направлении, но начинают выходить из столбика геля при переносе в уравновешивающий буфер. Диффузия белка из геля продолжается при разделении во втором направлении, из-за чего белок может расползаться вдоль столбика, а затем перемещаться во втором направлении в виде горизонтальной полосы. Этого можно избежать, промывая столбик геля перед его нанесением на пластину для разделения во втором направлении. Правда, этот прием эффективен не всегда. Описанный в этой главе метод основывается на том, что клетки гибридом способны включать радиоактивную экзогенную метку в синтезируемые ими белки. Очищенные антитела стабильны и специфически связываются с любой клеткой-мишенью, живой или убитой, если эта клетка несет антигены, узнаваемые данными антителами. Тест связывания антител надежен, достаточно гибок и хорошо воспроизводим. Он позволяет получать количественные данные, причем результаты регистрируются автоматически. Примеры использования этого метода, приведенные в данной главе, полностью относятся к исследованиям ал- лоантигенов мышей, однако подобный подход применим ко всем типам клеток, для которых имеются соответствующие мо- ноклональные антитела. Существует много вариантов детектирования антигенов клеточных поверхностей за счет связывания специфических антител. Ряд этих методов описан в первой книге из серии, редактируемой И.

Отдых на море в Бердянске

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.