Если объем ДНК превышает 2 мл, то ее осаждают этанолом Maniatis et al.1982 и вновь растворяют в ТЭ-буфере 2 мл в течение ночи. После центрифугирования из пробирок с помощью насоса медленно отбирают фракции по 0,7 мл собирают около 30 фракций с помощью коллектора. По 10 мкл каждой из фракций 1-17 анализируют в 0,3-ном агарозном геле вместе с маркерными фрагментами ДНК фага К, которые наносят на среднюю и крайние дорожки геля. К маркерным фрагментам добавляют по 10 мкл 40-ного раствора сахарозы, чтобы концентрация сахарозы и солей в них была такой же, как и в пробах. Длительность электрофореза составляет 16 ч при 40 В. Фракции, содержащие фрагменты ДНК размером от 30 до 50 kb, объединяют фракции, содержащие фрагменты ДНК размером 30 kb отбрасывают и осаждают 2,5 объемами этанола соль дополнительно не добавляют. Материал перемешивают и оставляют при -25 С на ночь. На следующий день пробирки нагревают до комнатной температуры для того чтобы растворить сахарозу, если она выпала в осадок и собирают ДНК центрифугированием. Если общий объем составляет 10 мл, то ДНК осаждают в полиалломерной пробирке ротора SW27. Чтобы пробирка не разрушилась при центрифугировании, ее заполняют доверху 70-ным этанолом. Длительность центрифу- Представленная ниже пропись относится к космидному вектору pNNL Brosveld et al.1982, содержащему ген Eco-gpt, облегчающий перенос клонированных генов в эукариотические клетки. Эту пропись с соответствующими модификациями можно применить и в случае других космидных векторов. Одну аликвоту ДНК вектора pNNL 20 мкг гидролизуют рестрикта- зой Нра, а другую такую же — рестриктазой Clal. Добавляют по 20 ед. каждого фермента инкубируют 4 ч при 37 С.

В любое время Вы можете при желании пойти в институт бизнеса и политики, чтобы получить второе высшее образование, которое на сегодня считается престижным.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.