Недвижимость в Брянской области

Очистка с помощью преципитации Как отмечено выше, сульфат аммония можно добавлять непосредственно к культур альной жидкости до достижения 50-ного насыщения 29,1 г на 100 мл. Раствор выдерживают на холоду 1-2 дня до тех пор, пока не сформируется видимый осадок. Преципитированный материал осаждают центрифугированием 30 мин при 2000 g при 10 С и растворяют в 110 исходного объема ЗФР. Затем к полученному раствору добавляют равный объем НСА и минимум в течение ночи выдерживают смесь на холоду для формирования осадка. Еще раз повторяют всю процедуру переосаждения. Полученный в результате финальный осадок растворяют в 1 мл ЗФР и диализуют сначала против ЗФР, а потом в течение ночи против трех смен буфера с низкой ионной силой. Диализ удобно проводить в простом устройстве, которое описали Полит и соавторы Pohlit -et al.1979. Это устройство дает возможность проводить одновременный диализ многих образцов и легко получать после диализа радиоактивный материал. Образовавшийся в буфере с низкой ионной силой преципитат осаждают центрифугированием, но супернатант, который иногда содержит большую часть антител, не выливают, а сохраняют. К осадку добавляют 1 мл ЗФР и ту часть его, которая переходит в раствор, используют как очищенный препарат антител; нерастворившуюся часть осадка отбрасывают. Очищенный препарат антител и супернатант в буфере с низкой ионной силой хранят при 4С после добавления азида натрия и БСА, как описано выше. Эффективность преципитации буфером с низкой ионной силой, к сожалению, варьирует в значительной степени. Для многих IgM формируются осадки, содержащие почти всю активность антител. Из этих осадков получают препараты антител, дающие удовлетворительные результаты в тестах связывания табл. 12-1, правда, не такие хорошие, как в случае IgG.

здесь на сайте Настольные сады найдешь

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.