нц-фильтры кладут площадь пиков для данного когичестваЕсли необходимо получить информацию только по связыванию флуоресцентного зонда с жизнеспособными клетками, то к мышиным антителам, меченным ФИТЦ, добавляют иодистый пропидий до конечной концентрации 10 мкгмл. Мы использовали меченные ФИТЦ мышиные МА против легких каппа-цепей иммуноглобулинов крыс или против Fc-фрагмента иммуноглобулинов крыс в концентрациях 5-10 мкгмл. Конъюгаты ФИТЦ с МА имеют отношения флуоресцеин белок в диапазоне 1-3. После добавления меченых антител содержимое лунок ресуспендируют многоканальной пипеткой, как описано в п. 4. Панель инкубируют в ледяной бане 20-25 мин. Повторяют процедуры, описанные в п. 3 и 4. Ресуспендируют содержимое каждой лунки в 150 мкл буфера для ИФМ и переносят суспензию в пробирку Falcon 2052 для подачи образца на ПФКС. Каждую лунку промывают дополнительно 150 мкл буфера. Клетки 5-Ю3-104 клеток на тестируемую пробу куль- туральной жидкости анализируют на ПФКС и на основании полученных результатов идентифицируют те гибридные клоны, культуральные жидкости которых содержат антитела к антигенам клеточной поверхности. Методика работы на ПФКС и условия анализа описаны Лейзерсоном в гл. 20. Слабопозитивные клоны можно подвергнуть повторному анализу после того, как удастся сконцентрировать соответствующие культуральные жидкости. Все позитивные культуры можно нарастить до объема 1 мл. Можно также накопить необходимое количество культу- ральной жидкости для того, чтобы исследовать связывание продуцируемых антител с набором клеточных линий, представляющих различные стадии дифференцировки линии В-лимфоцитов, а также с клетками других линий табл. 10-1. Этот анализ можно проводить одновременно с клонированием всех позитивных культур для селекции клонов, продуцирующих антитела, специфичные к определенным субпопуляциям лимфоидных клеток.

Астигматизм лечение народными средствами по книге народной медицины.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.