Смесь для формирования зон гемолиза состоит из равных объемов 20-ной суспензии конъюгированных эритроцитов, кроличьей антисыворотки к р-цепям мыши, разбавленной в соотношении 1 20 CP и комплемента морской свинки Behringwerke A. G.абсорбированного бараньими эритроцитами и разбавленного в соотношении 1 4 СР. Для получения зон гемолиза панели центрифугируют 150g, 10 мин, 4С и культуральную среду стряхивают. Затем мультипипеткой Titertek в каждую лунку добавляют 50 мкл смеси, предназначенной для образования зон гемолиза. Содержимое 50 мкл пяти лунок один ряд отбирают мультипипеткой и разливают в стеклянные пробирки на 5 мл, содержащие по 250 мкл теплого агара 5-ный агар в CP при конечной концентрации ДЭАЭ-декстрана 0,05; водяная баня 46 С. Содержимое всех пяти пробирок быстро перемешивают на вортексе и заливают в пластиковые чашки Петри диаметром 10 см. На слой агара кладут круглые покровные стекла диаметр 22 мм; Assistent, Glaswarenfabrik К. Hecht, 8595, Швейцария и затем чашки инкубируют в увлажненном инкубаторе при 37 С. Зоны гемолиза подсчитывают 4-5 ч спустя. Популяция костномозговых клеток-предшественников, использованная в эксперименте, проиллюстрированном на рис. 14-1, содержала не более одной sIgM-секретирующей клетки на 50 000 клеток, а частота встречаемости клеток, чувствительных к ЛПС, в этой популяции была ниже Ю-4. Культивирование таких клеток-предшественников на прикрепившихся клетках костного мозга приводит к возникновению двух пиков образования функционально зрелых В-клеток рис. 14-1. Ранний пик с частотой встречаемости ЛПС-реактивных клеток, варьирующей от 1 20 до 1 30, появляется после 24-48 ч инкубации. Прикрепившиеся клетки костного мозга усиливают эту раннюю генерацию В-клеток, но она наблюдается и в их отсутствие. Второй пик В-клеточной дифференцировки с частотой встречаемости ЛПС-реактивных клеток от 1 50 до 1 100 наблюдают через 5-6 сут культивирования. Эта поздняя генерация зависит от присутствия слоя прикрепившихся клеток.

Если требуется баннер для сайта — изготовление баннеров от профессиональной вебстудии.Флеш баннеры для рекламы в интернете.

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.