на микроинъекции генов преимущества обусловленыEdmonton, Alberta, Канада; Sokerbolaget, Arlov, Швеция. Антитела разводят так, чтобы связывание составляло 50-75 максимального, и смешивают их с серийными разведениями гаптена. Концентрация гаптена, необходимая для ингибирования связывания антител, относительно высока и составляет около 1 мМ рис. 9-2. Это обусловлено, вероятно, тем, что равновесие смещено в сторону связывания антител с антигеном, иммобилизованным на носителе, а не в сторону связывания с моновалентным гаптеном. В тесте связывания гаптенов можно также применять меченные 3Н олигосаха- риды Smith et al.1981. Гаптены с высокой удельной активностью легко получить при восстановлении свободных олигоса- харидов NaB3H4. Можно также метить смеси олигосахаридов, отщепленные от гликопротеинов в результате fj-элиминации или расщепления эндогликозидазой Н. Мы используем модификацию обычного метода, в которой первым шагом является иммобилизация очищенных антител за счет неспецифической адсорбции в лунках панелей для микротитрования. После блокирования с помощью БСА буфер А остаточной неспецифической адсорбционной способности полимера в лунки вносят меченные 3Н олигосахариды удельная активность 2 Киммоль в концентрации 107 расп. мин-мл в том же буфере. После инкубации в течение ночи несвязанный гаптен отмывают, лунки еще раз промывают, элюируют связанный с антителами гаптен 5-ным аммиаком и определяют его количество в сцинтил- ляционном счетчике. Элюированный гаптен можно охарактеризовать с помощью хроматографии на бумаге или гель-проникающей хроматографии Yamashita et al.1982.

любительское порно

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.