качестве покрывающих целесообразно проеерять данные которые необходимыЕсли анализируется большое число разных антител, то выгодней метить вторичный реагент для их непрямого выявления. Правда, белок А можно использовать только для некоторых классов антител, антитела против иммуноглобулинов не всегда могут применяться при работе с В-клетками. Если гибридомная линия, синтезирующая необходимые моноклональные антитела, отсутствует, то приходится использовать один из перечисленных выше методов мечения антител. Однако и в этом случае можно в дальнейшем предусмотреть биосинтетическое введение метки в антииммуноглобулиновые моноклональные антитела, поскольку их можно использовать вместо иодированных реагентов. В принципе можно использовать любую меченную радиоактивным изотопом аминокислоту, которая включается в белки с достаточной эффективностью. Мы, например, предпочитаем 3Н-лейцин. Лейцин является необходимой аминокислотой, в достаточной степени представленной в иммуноглобулинах. Кроме того, среды, не содержащие лейцина, имеются в продаже. Тритий стоит дешевле, чем 14С, и может быть получен с большей удельной активностью. Различие в периодах полураспада между этими изотопами в данном случае не имеет существенного значения, так как эти периоды превышают продолжительность обычного пребывания исследователей на академических должностях. 14С может иметь преимущества тогда, когда встречаются осложнения, связанные с тушением люминесценции. Если требуется очень высокая удельная активность, то применяют 35S-Me- тионин, однако при этом необходимо чаще получать и очищать меченые антитела использовать их в более короткие сроки. Приведенный здесь метод с применением 3Н-лейцина может быть использован при работе с любой меченой аминокислотой или смесью аминокислот. При этом нужна только культураль- ная среда, не содержащая соответствующей аминокислоты или аминокислот. Такие среды легко готовить, используя Select- Amine Kit Gibco. Из культуральных матрасов удаляют клетки гибридом в экспоненциальной фазе роста; при этом наиболее жизнеспособные клетки остаются прикрепленными к стенкам матрасов. Матрасы дополнительно промывают ГКН-буфером и новую порцию смытых клеток объединяют с клетками, полученными при первом удалении среды. К клеткам, оставшимся в матрасах, добавляют 4 мл среды для мечения, предварительно подогретой до 37С и насыщенной газовой смесью, состоящей из 7 Ог и 83 N2.

рихтовка подкрановых путей

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.