К этому времени культуральную среду заменяют 2 мл полной среды RPMI 1640, содержащей гидратированный микроноситель Cytodex 1 в концентрации 1 мгмл. Оседая, гранулы микроносителя образуют правильный монослой. Инкубацию продолжают еще 4 дня, в течение которых клетки со дна лунок распространяются по поверхности микроносителя. Когда слой клеток на микросферах становится конфлюентным, культуры готовы к заселению предшественниками В-клеток. Клетки мышей BALBc вымывают из полости бедренной кости, как описано в разд. IV, А, а прикрепляющиеся клетки удаляют фильтрацией через гранулы сефадекса G-10 Ly, Mis- hell, 1974. В стерильный пластиковый шприц на 5 мл помещают небольшой кусочек влажной стеклянной ваты, на которую пипеткой осторожно наливают 5 мл суспендированного в воде сефадекса G-10. Колпачок, закрывающий выход из шприца, заменяют иглой 18, после чего жидкость ЗФР свободно вытекает из шприца. Колонку промывают 30 мл полной среды RPMI 1640 забуференной 20 мМ ГЭПЭС и уравновешивают при комнатной температуре в течение ночи. На колонку наносят 1 мл суспензии, содержащей не более 108 клеток в забуференной ГЭПЭС полной среде RPMI 1640, и позволяют жидкости впитаться в слой сефадекса. После этого добавляют 1 мл среды, оставляют колонку при комнатной температуре на 10 мин и затем промывают ее 12 мл среды. Клетки элюата дважды промывают холодным CP 200 g, 10 мин, 4С.

Самарские автомобили – большой выбор, отличные цены!

Оставить комментарий

Вы должны авторизоваться для отправки комментария.