Архив рубрики «Клиника»

К ним относятся вырабатываемый клетками WEHI-3 ростовой фактор для нескольких линий гемопоэти- ческих клеток мультилинеарный гемопоэтический ростовой фактор, или, сокращенно МГРФ Iscove et al.1982; вырабатываемый клетками L929 фактор, стимулирующий рост макро- фагальных колоний или колониестимулирующий фактор 1, сокращенно КСФ-1 Stanley, Heard, 1977; фактор, стимулирующий гранулоцитарные и макрофагальные колонии ГМ-КСФ, который был получен из культуральной среды, кондиционированной клетками легкого мышей Burgess et al.1977. Во всех случаях, однако, стимуляция этими факторами образования антитело-синтезирующих колоний оказалась зависимой от первоначальной плотности клеток в культуре Paige, 1984; Paige et al.1984. Линия регрессии, построенная в логарифмическом масштабе и оптимально удовлетворяющая данным экспериментов по титрованию, имеет наклон, равный 2-3. Это согласуется с гипотезой о том, что образование колоний в этих культурах лимитирует более чем один тип клеток или более чем один клеточный продукт. Поскольку все упомянутые ростовые факторы обладают способностью стимулировать рост колоний, содержащих макрофаги, возможно, что в этих условиях в дополнение к колониеобразующим пре-В-клеткам лимитирующими факторами являются макрофаги или их продукты. Соображения о важной роли макрофагов в дифференцировке В-клеток уже высказывались ранее Hoffman, 1980; Kincade et al.1981 a, b; Giri et al.1984. Как правило, мы вносим в культуральную среду липополисахарид ЛПС; 25 мкгмл. Опыты, в которых ЛПС добавляли в среду с некоторой задержкой, показали, что он требуется для роста колоний только начиная с 4-х суток культивирования при 8-суточном периоде культивирования. Этот результат, очевидно, указывает на то, что исходные клетки-предшественники в отличие от возникающих в культуре В-клеток, вероятно, нечувствительны к ЛПС. Такая интерпретация согласуется с ранее полученными данными Melchers, 1977а. Мы исследовали поверхностные маркеры на предшественниках В-клеток, используя методику, в которой клетки, экс- прессирующие данный антиген, связываются с пластиковой чашкой Петри, предварительно покрытой соответствующими моноклональными антителами Wysocki, Sato, 1978. Из исследованных антигенов первым появляется антиген, распознаваемый моноклональными антителами АА4.

скачать AVG Anti-Virus Free

1981. При использовании аффинной хроматографии на колонках с белком А или другими лигандами для выделения моноклональных антител возникают трудности, обусловленные десорбцией лигандов с матрицы колонки что может помешать в дальнейших клеточных исследованиях, а также достаточно жесткой обработкой, необходимой в некоторых случаях для элюции антител с аффинных колонок. На колонках для ГА-ВЖХ связываются все моноклональ- ные IgG мыши и крысы Henson, 1985. Профиль элюции моно- клонального IgG2b из асцитной жидкости мышей приведен на рис. 7-5. Мышиные и крысиные моноклональные IgG элюиру- ются с колонки ГА-ВЖХ при концентрациях фосфатов от 60 до 200 мМ. Очистка в одну стадию достижима для моноклональных антител, которые элюируются при высоких концентрациях фосфатного буфера. Некоторые моноклональные антитела элюируются при низких концентрациях фосфата и плохо отделяются от основной массы сывороточных белков. Предварительное осаждение глобулинов сульфатом аммония дает возможность получать с помощью ГА-ВЖХ очищенные препараты многих, но не всех типов моноклональных антител. Тем не менее из собранных иммуноглобулиновых фракций трудноочищае- мых антител после диализа и рехроматографии удается получать достаточно чистые препараты, хотя и с некоторыми потерями. Еще один вариант использования колонок ГА-ВЖХ основан на том, что с их помощью можно дифференцировать специфические моноклональные антитела по различиям в их легких цепях Juarez-Salinas et al.1984. Показано, что моноклональные антитела имеют различные легкие цепи, что позволило разделить антигенсвязывающие и неактивные антитела, содержащие легкие цепи разных типов. Моноклональные антитела, очищенные на аффинной колонке, т. е. специфически связывающиеся с антигеном, также гетерогенны по структуре цепей, что выявляется при ГА-ВЖХ .

надёжное повышение потенции

того флаконы с iso-гелями принципеФильтры просто проводят через еще одну реакцию гибридизации, промывают и экспонируют с рентгеновской пленкой. Новые положительные колонии выявляют путем сопоставления новых пленок с теми, которые были получены в предшествующих гибридизациях. После гибридизации гибридизационный раствор сливают и хранят при -20 С. Его используют для повторного скрининга положительных колоний. Фильтр промывают в коробке двухлитровыми порциями подогретого буфера. Условия промывки можно варьировать. В большинстве случаев мы проводим промывку при 65С два раза в растворе 3XSSC, 0,1-ного ДСН и два раза в растворе lxSSC, 0,1-ного ДСН. Продолжительность каждой промывки составляет от 20 до 30 мин. Ее осуществляют при постоянном перемешивании на ротационной качалке, снабженной водяной баней. Радиоактивность фильтров после промывки определяют с помощью счетчика Гейгера. По завершении последней промывки она должна быть близка к фону. Фильтры вынимают из коробки и раскладывают на бумаге Whatman 3 ММ для идентификации. Их не высушивают, а просто отжимают избыток жидкости. Для радиоавтографии фильтры помещают по два в кассету для пленки размером 35X Х43 см на заранее нарезанные листы бумаги Whatman 3 ММ так, что фильтры незначительно перекрываются в средней части. Начинают с фильтров 1 и 2 на первом листе бумаги и помещают фильтры 2 и 1 в указанном порядке на второй лист и т.

Сайт по поиску работы. заработок в интернете на своем сайте

Надосадочную жидкость удаляют из лунок, как описано в п. 4, и добавляют в лунки по 25 мкл меченных ФИТЦ мышиных антител против иммуноглобулинов крысы, разбавленных до соответствующего разведения. Если необходимо получить информацию только по связыванию флуоресцентного зонда с жизнеспособными клетками, то к мышиным антителам, меченным ФИТЦ, добавляют иодистый пропидий до конечной концентрации 10 мкгмл. Мы использовали меченные ФИТЦ мышиные МА против легких каппа-цепей иммуноглобулинов крыс или против Fc-фрагмента иммуноглобулинов крыс в концентрациях 5-10 мкгмл. Конъюгаты ФИТЦ с МА имеют отношения флуоресцеин белок в диапазоне 1-3. После добавления меченых антител содержимое лунок ресуспендируют многоканальной пипеткой, как описано в п. 4. Панель инкубируют в ледяной бане 20-25 мин. Повторяют процедуры, описанные в п. 3 и 4. Ресуспендируют содержимое каждой лунки в 150 мкл буфера для ИФМ и переносят суспензию в пробирку Falcon 2052 для подачи образца на ПФКС. Каждую лунку промывают дополнительно 150 мкл буфера. Клетки 5-Ю3-104 клеток на тестируемую пробу куль- туральной жидкости анализируют на ПФКС и на основании полученных результатов идентифицируют те гибридные клоны, культуральные жидкости которых содержат антитела к антигенам клеточной поверхности.

Компания Ти-Рекс: стальные российские двери здесь. Надежность и качество.

По пептидному картированию с помощью ВЖХ существует обширная литература. Обратнофазовые матрицы для ВЖХ чаще всего готовят на основе силикагеля. В качестве покрывающих групп обычно используют С8- или С18-группы, а в качестве исходного компонента подвижной фазы — различные растворители раствор А. Чаще других применяют трифторуксусную кислоту ТФК в концентрации 0,1-1. При повышении концентрации ТФК разрешение улучшается за счет ион-парного взаимодействия Regnier, 1983. Однако при этом возникают проблемы при детектировании, так как ТФК имеет относительно высокое поглощение в УФ-диапазоне. При концентрации ТФК 0,5 измерения при 214 нм уже невозможны. Элюцию производят неполярным растворителем раствор Б. Обычно предпочитают использовать ацетонитрил, так как он не поглощает УФ-свет и обладает низкой вязкостью. Как правило, ион-парный реагент ТФК добавляют к растворителю Б в той же концентрации, в которой он содержится в растворе А исходная подвижная фаза. ТФК в концентрации 0,1 обеспечивает хорошее разрешение, а также возможность детектирования белка при 214 нм. С помощью ОФ-ВЖХ пытались разделять целые молекулы иммуноглобулинов Alvarez et al.1981; Henson, неопубликованные данные, однако удовлетворительных результатов получить не удалось, поскольку с колонки элюировался широкий пик с плохим разрешением. Вместе с тем такой результат может быть хорошим показателем неполного расщепления антител.

какой фотоаппарат лучше

приведенная ниже прописьТеперь, когда мы обсудили некоторые технические проблемы и подходы к их решению, можно перейти к описанию методик, которые были с успехом использованы при проведении упомянутых выше процедур анализа. Через три или четыре дня у крыс удаляют в стерильных условиях селезенки и каждую из них рассматривают в качестве индивидуального объекта исследования. Крысы существенно различаются по ответу на антигены лимфом, поэтому не следует смешивать клетки от сильно отвечающего животного с клетками от слабо реагирующей особи, так как это ведет к уменьшению содержания нужных клеток. Селезенки диспергируют до отдельных клеток и суспензию отфильтровывают через пастеровскую пипетку, заполненную рыхло упакованным кусочком ваты. Полученную суспензию промывают в конической пробирке на 50 мл избытком сбалансированного солевого раствора, содержащего глюкозу CPглюкозой, с помощью центрифугирования при 250 g в течение 5 мин. Супернатант удаляют, клетки вновь суспендируют в 15 мл 0,017 М триса, 0,14 М хлористого аммония, рН 7,2, для того чтобы лизировать эритроциты, инкубируют 5 мин при комнатной температуре. Добавляют 35 мл CPглюкозы и еще два раза промывают клетки, затем их ресуспендируют примерно в 5 мл CPглюкозы и подсчитывают жизнеспособные клетки которых должно быть 80 в 0,1-ном трипановом синем. Смешивают 108 жизнеспособных клеток селезенок крыс с 5-Ю7 жизнеспособных клеток миеломы линии Sp20-Agl4 или FO, полученных из культур в логарифмической фазе роста и предварительно отмытых 3 раза CPглюкозой для удаления сыворотки. Общий объем клеток селезенки и миеломных клеток не должен превышать 10 мл. Лучше всего использовать объемы от 5 до 10 мл, так как при больших объемах имеет место эффект расслоения клеток по плотности, приводящий к отделению более крупных миеломных клеток от спленоцитов. Образец объемом 5-10 мл центрифугируют в конической пробирке на 50 мл при 250 g 5 мин и удаляют супернатант. К клеткам добавляют по каплям 1 мл 50-ного ПЭГ 4000, рН 7,2-7,4, подогретого до 37 С. В ходе добавления ПЭГ клеточную суспензию постоянно перемешивают. После 60 с инкубации с ПЭГ медленно добавляют 20 мл СРглюкозы, подогретой до 37 С. Смесь инкубируют 2 мин, а затем добавляют 30 мл CPглюкозы и центрифугируют при 250 g 5 мин. После центрифугирования супернатант удаляют, а клеточный осадок осторожно ресуспендируют в 5-10 мл полной куль- туральной среды, содержащей сыворотку плода коровы СПК.

Столичный Центр Бизнеса: курсы кассиров в москве недорого. Переобучение.

В современных частных клиниках нас сегодняшний день не стоит очередь потенциальных клиентов (пациентов). Есть версия, что отношение цены к качеству обслуживания является основным критерием выбора, но это только заблуждение. Для того, чтобы круг клиентов стал значительно шире, нужно позаботиться о расширении диапазона медицинских услуг в то время когда зачастую случается все наоборот. Немаловажной является высокая квалификация специалистов, а также безопасность и эффективность технологий, которые используются при выполнении медицинских услуг, в том числе программ, предназначенных против старения. Большое значение имеет участие бренда клиник в крыпных региональных конференциях и выставках, а также привлечение клиентов посредством активной рекламы в средствах массовой информации. Прочитать остальную часть записи »

на протяжении последних нескольких лет средуVoller et al.1976. Изотип-специфический иммуноферментный анализ осуществляют следующим образом. Полистиреновые лунки микропанелей Dynathech, Billinghurst, Sussex, Англия обрабатывают в течение ночи при 4С иммуноглобулиновой фракцией кроличьей антисыворотки к р,- у- или а-цепям человека, полученной от фирмы Dakopatts Copenhagen, Дания; 50 мкгмл IgG в 20 мМ фосфатном буфере, рН 7,5, или мышиными монокло- нальными антителами Е-45 против е-цепей человека 10 мкгмл; любезно предоставленными G. Damiani из Генуэзского университета. Лунки промывают ЗФР и вносят в них определенные разведения проб в ЗФР — 5 СПК при комнатной температуре на 2 ч. Лунки промывают и на следующие 2 ч вносят меченные щелочной фосфатазой кроличьи антитела к р,- у- и а-цепям человека. Для количественного определения IgE добавляют кроличьи антитела к -цепи человека, а затем конъюгированные со щелочной фосфатазой козьи антитела к иммуноглобулинам кролика. После окончательной отмывки определяют связанную с лунками ферментативную активность, используя раствор п-нитрофенилфосфата 1 мгмл в 10-ном ди- этаноламиновом буфере, рН 9,8. Оптическое поглощение измеряют на автоматическом фотометре Flow Multiskan. Для построения стандартных кривых используют стандартную сыворотку или известное количество очищенного иммуноглобулина. Чувствительность теста составляет 10 нгмл для IgM, IgG и IgA и 0,5 нгмл для IgE. Примесь очищенного иммуноглобулина постороннего изотипа вплоть до концентрации 10 мкгмл в тесте не обнаруживается. Т-клетки, повторно стимулированные во вторичной СКЛ и размноженные в среде GM в течение 1-2 нед, растут в суспензии, состоящей из отдельных клеток, и обладают жизнеспособностью, близкой к 100.

Группа компаний Пожарный эксперт: аудит пожарной безопасности. Проверка систем пожаротушения.

содержимое один и тот же набор фильтров липидыОбразовавшийся в буфере с низкой ионной силой преципитат осаждают центрифугированием, но супернатант, который иногда содержит большую часть антител, не выливают, а сохраняют. К осадку добавляют 1 мл ЗФР и ту часть его, которая переходит в раствор, используют как очищенный препарат антител; нерастворившуюся часть осадка отбрасывают. Очищенный препарат антител и супернатант в буфере с низкой ионной силой хранят при 4С после добавления азида натрия и БСА, как описано выше. Эффективность преципитации буфером с низкой ионной силой, к сожалению, варьирует в значительной степени. Для многих IgM формируются осадки, содержащие почти всю активность антител. Из этих осадков получают препараты антител, дающие удовлетворительные результаты в тестах связывания табл. 12-1, правда, не такие хорошие, как в случае IgG. Этим способом можно эффективно очищать также некоторые крысиные моноклональные антитела субкласса IgG2. Простота про-Таблица 12-1. Тест связывания с использованием мышиных IgM-антител, Все моноклональные антитела можно метить биосинтетическим способом без потери активности или специфичности. Для очищенных иммуноглобулинов доля радиоактивности, приходящаяся на антитела, способные связываться с антигеном, зависит прежде всего от того, синтезируют ли соответствующие гибри- домные клетки дополнительные тяжелые их можно удалить или легкие цепи миеломных родительских клеток и какова интенсивность этого синтеза. Как следует из наших данных, у нескольких гибридом, которые не синтезировали дополнительных цепей иммуноглобулинов, доля связывающихся с антигеном антител в очищенных препаратах иммуноглобулинов составляла более 90. Очищенные антитела могут храниться в течение очень длительного времени при 4С с азидом натрия и БСА без какой- либо потери активности. Мы используем препараты, приготов- ленные 5 лет назад, и результаты, получаемые на них, со временем не ухудшаются. При хранении в течение двух лет примерно из 30 препаратов антител явно потерял активность только один.

РПК Креатив: изготовление рекламных вывесок стоимость. Современные рекламные вывески.

для в условиях погного отсутствия некоторыхПосле инкубации в течение 6 ч при 4С пластину промывают 6 раз по 1 мин охлажденным ЗФР на качалке для удаления избытка антител. Затем инкубацию повторяют в тех же условиях с меченными 1251-антителами 5-Ю6 импмин-мл против IgG мыши в буфере Б. После инкубации в течение 6-12 ч и отмывки ЗФР в тех же условиях хроматограмму высушивают и экспонируют с рентгеновской пленкой. Д. Химическое окрашивание Пластину для ВЭТСХ с алюминиевой или, что предпочтительнее, стеклянной подложкой размечают карандашом; образцы минимальное количество 1 мкг наносят на пластину, как описано выше. После хроматографии и высушивания пластину подвергают действию паров иода в течение 5 мин. При этой обработке все нейтральные липиды, фосфолипиды и гликолипиды окрашиваются в цвета от желтого до темно-коричневого. Приобретаемая окраска нестабильна. Хроматограмму можно также опрыскать под тягой реагентом А, высушить и опрыскать реагентом Б. При нагревании хроматограммы при 100 С в течение 5 мин развивается окраска от розовой до пурпурной. Этот метод окрашивания весьма чувствителен; при его использовании выявляются все углеводы. Ганглизоиды, содержащие сиа- ловую кислоту, окрашиваются в голубой цвет, после того как опрысканную реагентом В хроматограмму выдерживают 5 мин при 110С.

Компания Экстра Айс: продажа торговых стеллажей дешево. Качественное торговое оборудование.