Архив рубрики «Основное»

Инжектор высокого давления должен быть также удобным в работе. Накопленный в нашей лаборатории опыт позволяет заключить, что для разделения белков с помощью ВЖХ наиболее подходящим является инжектор с петлей на 2 мл. Инжектор позволяет вводить в петлю любой объем образца вплоть до 2 мл. При повороте клапана инжектора петля подсоединяется таким образом, что на колонку первой подается последняя введенная в петлю порция образца. Это сводит к минимуму размазывание полосы материала, что особенно важно для ГП-ВЖХ. Для разделения белков пригодны многие наполнители колонок, но лучше всего для этих целей использовать крупнопористые матрицы, для которых характерно низкое неспецифическое связывание белков. В состав большинства систем ВЖХ входят предварительные колонки, предохраняющие от порчи более крупные и дорогостоящие разделяющие колонки. Для предварительных колонок часто используют тот же наполнитель, что и для основных. В случае ОФ-ВЖХ разделения проводили и просто на одних предварительных колонках Bhown, Bennett, 1984. Для белков большинство детекторов регистрирует поглощение УФ-света или флуоресценцию. Имеются разнообразные ультрафиолетовые детекторы, работающие в сканирующем режиме, а также детекторы с изменяемой или фиксированной длиной волны. Коллектор фракций для ВЖХ должен работать достаточно быстро, чтобы успевать за высокой скоростью элюции; имеется много типов пригодных для этих целей коллекторов фракций. В нашей лаборатории методы ВЖХ используют для очистки изучения структуры и функции иммуноглобулинов. Ниже приведены детальные описания применяемых вариантов ВЖХ и примеры их использования. ГП-ВЖХ применяют для разделения легких и тяжелых цепей антител после восстановления и ал- килирования. Этот метод используют также для очистки фрагментов антител после их химического расщепления.

Снять сегодня дворец для cвадьбы — это не такая уж и сложность — были бы деньги и желание

Если в методе Окаямы — Берга в качестве линкера использовать фрагмент 7mdIII — Pvul плазмиды ptrpLM, то все молекулы кДНК библиотеки будут обладать промотором, участком связывания рибосомы и кодоном AUG, и большинство клонов, включая неполные кДНК, будут экспрессироваться при индукции триптофанового оперона. Поскольку плазмида содержит триптофановый промотор, репрессированный в нормальных условиях, необходимо индуцировать клетки, чтобы получить экспрессию тех кДЦК которые могут содержаться в плазмидах. Обычно в качестве мощного индуктора триптофанового оперона применяют индолилакрило- вую кислоту ИАК Morse et al.1969. Индуцируемые клетки выращивают на среде М9, содержащей 0,25 казаминокис- лот и 0,5 глюкозы. После выращивания в течение ночи при температуре 30 С культуру разбавляют в 10 раз свежей средой М9 плюс казаминокислоты и глюкоза инкубируют при 30 С 1 ч. Добавляют 1100 объема раствора ИАК 1,5 мгмл в этаноле инкубируют культуру еще 2 ч при 30 С Halle- well, Emetage, 1980. Для экспрессии кДНК в эукариотических клетках необходимо вставить в вектор эукариотический промотор, эукариоти- ческий сайт связывания с рибосомой, сигнал для сплайсинга РНК если это необходимо, сигнал терминации транскрипции или сигнал для присоединения poly А-концевой последовательности. Было опубликовано много успешных работ по экспрессии клонированной геномной ДНК в эукариотических клетках, поскольку клоны геномной ДНК обладают всем необходимым для экспрессии. В то же время экспрессия кДНК в эукариотических клетках — задача не из легких. Общий подход ее решения был разработан Окаямой и Бергом Okayama, Berg, 1983. Однако предложенные ими плазмидные векторы не содержат маркеров для селекции, которые необходимы для того, чтобы на ранних стадиях идентифицировать трансформированные клетки. Недавно Окаяма и Берг разработали новый метод трансформации эукариотических клеток с помощью вектора, представляющего собой комплекс кДНКплазмидафаг с геном NEO, с помощью которого можно получить высокую эффективность трансформации, до 1-3 П. Берг, личное сообщение.

торрент


загородная недвижимость

Некоторые из них приводят диффе- ренциально-диагностические симптомы, на основании которых, по мнению авторов, можно отличить абдоминальную форму псевдотуберкулеза от острого аппендицита. Однако эти признаки относятся к более поздним срокам наблюдения, как правило, не ранее третьих суток. Анализируя различные литературные данные Рольщиков И. М.Антонов В. И. ,1984, Малишевская Т. В. и соавт. ,1974, Буланьков Ю. И. ,1992 и др.можно выделить следующие, наиболее часто приводимые в качестве основных, признаки, характерные для ОАПЭ. Вместе с тем, в литературе достаточно часто встречаются сообщения о диагностике псевдотуберкулезного процесса у больных без типичных для этого заболевания симптомов Самсонов В. А.1977; Яремчук А. Я. Дойда А.

Не мучайтесь, предоставьте ремонт компьютера профессионалам.

Экстракция нативных или фиксированных формальдегидом клеток кипящим метанолом в течение 1 мин приводит к растворению части клеточных липидов, и метанольный экстракт в ряде случаев можно использовать без дальнейшей очистки для твердофазного радиоиммунологического анализа РИА. Использование РИА описано в разд. IV. Потеря антигенной активности клетками или срезами тканей после инкубации с нейраминидазой указывает на гликопро- теиновую или гликолипидную природу антигена и свидетельствует о том, что антигенная детерминанта содержит сиаловую кислоту. Для предварительной характеристики антигенов целых клеток могут применяться и другие гликозидазы при условии, что ферменты обладают достаточной специфичностью и свободны от протеолитической активности. А. Принцип методаБольшинство методов экстракции липидов основано на процедуре Folch et al.1957, позволяющей отделить полярные мембранные липиды от неполярных липидов — холестерола и триацилглицеридов. Сначала получают суммарный экстракт с помощью смеси хлороформа и метанола 21 по объему, а затем этот экстракт фракционируют, добавляя к нему 20 воды по объему. Более тяжелую фазу, содержащую в основном неполярные липиды, можно подвергнуть повторной экстракции смесью хлороформ — метанол — вода 35047 по объему. В состав легкой фазы входят ганглиозиды, нейтральные глико- сфинголипиды с более чем тремя остатками Сахаров, фосфоли- пиды, а также следовые количества белков, солей, органических кислот и глюкозы. Ниже описан упрощенный вариант оригинального метода, который позволяет получать препараты липидов, дающие удовлетворительные результаты при твердофазном РИА. Более полный выход ганглиозидов достигается при экстракции смесью хлороформ — метанол Svennerholm, Fredman, 1980 или смесью диизопропиловый эфир-1-бутанол Ladisch, Gillard, 1983. Для экстракции сильнополярных фосфатидили- нозитолфосфатов необходимы очень низкие значения рН Schacht, 1981, при которых разрушаются ганглиозиды. Легкую фазу липидного экстракта, полученного по методу Фолша, можно использовать в качестве антигена при твердофазном РИА без очистки или с дальнейшей очисткой. Его очистка состоит в освобождении от солей и низкомолекулярных примесей диализом или, что быстрее, адсорбцией липидов на патроне для обратнофазовой хроматографии с последующей элюцией их органическим растворителем. Освобождение экстракта от солей и низкомолекулярных примесей является обязательным этапом, если материал будет использован для ТСХ.

блог о политике

стандартные белковые образцы

Все недорогие гостиницы Екатеринбурга, с отзывами, ценами и фото, собраны на сайте 1eburg.ru. Здесь же можно забронировать номер совершенно бесплатно.

Поскольку удаление тритона Х-100 диализом — процесс весьма длительный, более предпочтительно его удаление с помощью сорбции на полистирольных гранулах SM2. Они представляют собой гидрофобные частицы, способные к сильной адсорбции молекул детергента Holloway, 1973. Смесь липидов и белков в растворе детергента инкубируют, встряхивая ее с гранулами SM2 до тех пор, пока не сформируются липосомы. К смеси, содержащей 1 мг липидов, 1 мг белков и 10 мг тритона Х-100 в объеме 1 мл, добавляют 0,25 мл буфера для реассоциации и 0,2 мл гранул SM2. Инкубируют смесь при постоянном встряхивании 3 ч при 20 С, а затем удаляют жидкую фазу и добавляют к ней новую порцию 0,2 мл гранул SM2. После еще одной инкубации со встряхиванием в течение 3 ч супернатант должен начать опалесцировать, что указывает на образование липосом. Если белки, выделенные на лентил-лектиновом или иммунном носителе, требуется реассоциировать с липидами после удаления детергента диализом, то необходимо заменить тритон Х-100 на детергент с малым размером мицелл, например на ок- тилглюкозид. Это легче всего сделать в тот момент, когда белки адсорбированы на аффинной колонке. Через колонку пропускают один объем буфера без тритона Х-100, содержащего 4,5 мгмл октилглюкозида. К липидно-детергентной пленке добавляют раствор белка и тщательно перемешивают смесь при комнатной температуре. Смесь переносят в диализный мешочек и диализуют против буфера для реассоциации в течение 18 ч с тремя сменами буфера. На образование липосом указывает появление в липидно-белко- вой смеси опалесценции. Е. Очистка липосомЛипосомы, полученные после удаления детергента из липид- но-белкового раствора, очищают с использованием центрифугирования в градиенте сахарозы Helenius et al.1977. При этом из препарата липосом удаляются растворимые и денатурированные белки. На градиент сахарозы 15-60 объем 4 мл в центрифужной пробирке для ротора SW50 Beckman наслаивают 1 мл липосомной суспензии.

Здесь книги по языкам программирования

для того чтобы избежать нестабильности существенно для

led прожекторы

Переваренные образцы охлаждаютв каждый флакон добавляют по 15 мл сцинтиллятора и образцы снова охлаждают. Soluene 350 при смешивании со сцинтиллятором дает очень высокий фоновый уровень счета. Фон исчезает по прошествии определенного времени и при охлаждении. Этот эффект зависит от качества толуола в сцинтилляторе. Обычно для снижения фона достаточно инкубации флаконов в течение 1 ч при 4С. Когда фон становится ниже 50 импмин, можно измерять образцы на сцинтилляционном счетчике. Обычное время счета- 1 минобразец; окна счетчика устанавливают для регистрации 3Н или 14С. В принципе описанный здесь метод может быть использован для любого поверхностного антигена и любых моноклональных антител. На практике применение метода лимитируется аффинностью антител и чистотой встречаемости антигена на поверхности клетки. В случае применения антител IgM, которые трудней получать в чистом виде, чем IgG, а также при работе с клетками-мишенями, содержащими большое количество Fc-рецепторов, например со спленоцитами, могут возникнуть серьезные проблемы, связанные с неспецифическим связыванием. Самые четкие результаты получают с лимфобластами, стимулированными Кон-А. При изучении клеток мышей нам удавалось получать хорошие результаты с моноклональными антителами против антигенов Н-2, la, TL, p2m, Thy-1, Ly-1 и Ly-2. Описанный метод был применен для детектирования новых антигенов на фибробластах, трансфецированных клонированными Я-2-генами табл. 12-2. Мы обычно используем этот метод для Н-2- и 1а-типирования стимулированных Кон-А спленоци- тов, которые также применяются как клетки-мишени для цито- токсических Т-клеток. Очень удобно, что эти клетки можно оставлять на холоду в течение ночи перед проведением теста связывания табл. 12-3. Для стандартного Н-2- и 1а-типирова- ния мышей-беккроссов мы хирургически удаляем два или четыре шейных лимфатических узла и готовим клеточную суспензию.

Звезды и планеты тут все о природе

Определялась четко выраженная лабильность пульса и уровня артериального давления. Характерными были также вегетативные расстройства потливость, чувство приливов, парестезии, похолодание рук и ног, головокружение. Патологические изменения в желудочно-кишечном тракте являются ведущими при иерсиниозе. При развитии гастро- интестинальной формы иерсиниоза наиболее часто поражение желудочно-кишечного тракта протекает в виде гастроэнтерита, а гастроэнтероколит развивается значительно реже. Имеют место симптомы интоксикации разной степени выраженности. Начало заболевания, как правило, острое, сопровождается болями в животе, тошнотой, повторной рвотой и жидким стулом. Одновременно присоединяются симптомы интоксикации озноб, повышение температуры, головная боль, головокружение, слабость, боли в костях и мышцах. Жидкий стул наблюдается у 91 больных. По данным JI. E. Бродова и соавт. 1989 у большинства больных частота стула достигала 10 раз в стуки. У 7 больных стул был настолько частым, что приводил к развитию обезвоживания 2-й степени. По данным Г. Н. Кареткиной и соавт. 1986 тошнота имела место в 88 случаев, рвота чаще всего многократная — в 69. При развитии абдоминальных форм иерсиниоза поражения желудочно-кишечного тракта проявляются в виде острого аппендицита, мезентериального лимфаденита, терминального илеита. У взрослых больных Г. Н. Кареткина и др.

Самая прекрасная цифровая фоторамка как правило инкрустирована кристаллами Сваровски.

На протяжении 50 лет гены МНС и детерминируемые ими молекулы исследовали с помощью серологических и биохимических методов. В последнее время выделение клонов кДНК, соответствующих генам МНС, ознаменовало собой начало интенсивного исследования генов МНС на молекулярном уровне. Успехам в молекулярном анализе генов МНС у мыши особенно способствовало выделение больших фрагментов ДНК с использованием систем клонирования в космидах. Из космид- ной библиотеки ДНК мышей линии BALBc было получено 60 космидных клонов, кодирующих 36 неидентичных генов класса I; эти гены удалось сгруппировать за счет перекрывания рес- трикционных карт в 13 генных кластеров класса I Steinmetz et al.1982а. Размер указанных кластеров составляет от 35 до 191 kb ДНК, причем каждый из них содержит от 1 до 7 генов класса I. К тому же выделение космидных клонов с использованием кДНК-зондов, относящихся к классу II, в сочетании с экспериментами типа прогулка по хромосоме дало возможность охарактеризовать целый район ДНК длиной более 200 kb, примыкающий к области I МНС Steinmetz et al.1982b. При этом было сделано несколько важных наблюдений, включая открытие горячей точки рекомбинации в середине гена, относящегося к классу II, были обнаружены не известные ранее гены класса II, был идентифицирован участок хромосомы в районе I, обладающий гипермутабильностью, и были получены доказательства, свидетельствующие против существования двух ранее предсказанных подрайонов, обозначавшихся I-B и I-J Steinmetz et al.1982b, 1984. Опыты по клонированию в космидах и опыты типа прогулка вдоль хромосомы использовались также для характеристики районов хромосомы, содержащих гены класса I, у мышей линии C57BL10 Weiss et al.1984.

лпж массаж

Смесь для формирования зон гемолиза состоит из равных объемов 20-ной суспензии конъюгированных эритроцитов, кроличьей антисыворотки к р-цепям мыши, разбавленной в соотношении 1 20 CP и комплемента морской свинки Behringwerke A. G.абсорбированного бараньими эритроцитами и разбавленного в соотношении 1 4 СР. Для получения зон гемолиза панели центрифугируют 150g, 10 мин, 4С и культуральную среду стряхивают. Затем мультипипеткой Titertek в каждую лунку добавляют 50 мкл смеси, предназначенной для образования зон гемолиза. Содержимое 50 мкл пяти лунок один ряд отбирают мультипипеткой и разливают в стеклянные пробирки на 5 мл, содержащие по 250 мкл теплого агара 5-ный агар в CP при конечной концентрации ДЭАЭ-декстрана 0,05; водяная баня 46 С. Содержимое всех пяти пробирок быстро перемешивают на вортексе и заливают в пластиковые чашки Петри диаметром 10 см. На слой агара кладут круглые покровные стекла диаметр 22 мм; Assistent, Glaswarenfabrik К. Hecht, 8595, Швейцария и затем чашки инкубируют в увлажненном инкубаторе при 37 С. Зоны гемолиза подсчитывают 4-5 ч спустя. Популяция костномозговых клеток-предшественников, использованная в эксперименте, проиллюстрированном на рис. 14-1, содержала не более одной sIgM-секретирующей клетки на 50 000 клеток, а частота встречаемости клеток, чувствительных к ЛПС, в этой популяции была ниже Ю-4. Культивирование таких клеток-предшественников на прикрепившихся клетках костного мозга приводит к возникновению двух пиков образования функционально зрелых В-клеток рис. 14-1. Ранний пик с частотой встречаемости ЛПС-реактивных клеток, варьирующей от 1 20 до 1 30, появляется после 24-48 ч инкубации. Прикрепившиеся клетки костного мозга усиливают эту раннюю генерацию В-клеток, но она наблюдается и в их отсутствие. Второй пик В-клеточной дифференцировки с частотой встречаемости ЛПС-реактивных клеток от 1 50 до 1 100 наблюдают через 5-6 сут культивирования. Эта поздняя генерация зависит от присутствия слоя прикрепившихся клеток.

Если требуется баннер для сайта — изготовление баннеров от профессиональной вебстудии.Флеш баннеры для рекламы в интернете.

,1984, Малишевская Т. В. и соавт. ,1974, Буланьков Ю. И. ,1992 и др.можно выделить следующие, наиболее часто приводимые в качестве основных, признаки, характерные для ОАПЭ. Вместе с тем, в литературе достаточно часто встречаются сообщения о диагностике псевдотуберкулезного процесса у больных без типичных для этого заболевания симптомов Самсонов В. А.1977; Яремчук А. Я. Дойда А. И. ,1984; Zweig A. Et all, 1977; Paff J. R. et all, 1976; Ponte M. C. et all, 1978; Dykes E. H. et all, 1987 и др. В таких, как правило, единичных случаях заболевания, установление этиологии болезни было обусловлено либо необычными операционными находками, либо характерными для псевдотуберкулезной инфекции изменениями, обнаруженными при гистологическом исследовании.

дешёвые домены